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药敏试验中的基本概念

2021-04-09 1645 返回列表

宠物临床常见的感染性疾病有脓皮症、耳炎、膀胱炎、呼吸道感染和外伤感染等,“药敏试验”为感染的治疗提供有效的治疗依据,所以越来越受到临床医生的重视。合理使用抗生素可以避免或减少耐药性的产生,同时也是兽医从业者的责任。


药敏试验的目的是筛选敏感抗生素以达到有效的抗菌治疗,从而缩短治疗周期,减轻动物痛苦。目前宠物临床诊疗中,经验性药物选择还是比较常见的,一旦机体被继发产生耐药后,再考虑药敏试验有可能会错过最佳的治疗时期,也为以后的感染治疗带来用药选择的困难。


01

什么是药敏试验?


  药敏试验是抗菌药敏感性试验(Antibacterial Susceptibility Test,AST)的简称,是指在体外测定细菌对抗菌药的敏感程度或耐药水平的一类试验。目前常用的药敏试验方法有:纸片扩散法(K-B法)、稀释法(肉汤稀释法、琼脂稀释法)等。纸片扩散法只能对药物的敏感程度定性测定,而稀释法则可定量测定药物对细菌的抗菌活性。


02

细菌敏感性,如何理解细菌敏感性下降?


  敏感性(susceptibility)是指细菌对抗菌药的敏感程度。不同的病原菌对不同的抗菌药物有不同的敏感性。一种抗菌药如果以很小的剂量即可抑制、杀灭细菌,则表示细菌对这种抗菌药“敏感”;反之,则“不敏感”或“耐药” 。


临床上按推荐剂量使用某种抗菌药后,机体血液或组织中一般能达到甚至超过抑制/杀灭致病菌的药物浓度,从而发挥抗感染作用。如果致病菌对该种抗菌药的敏感性下降,按推荐剂量用药将难以达到抑杀致病菌的药物浓度,则发挥不了抗感染作用。


  不同细菌对各种抗菌药的敏感性不同,同一种菌不同菌株对各种抗菌药的敏感性也存在差异。因此临床中开展药敏试验,可了解致病菌对哪些抗生素敏感,以便针对性地使用抗生素,减少盲目性。


03

什么是抗菌药的抗菌活性?


  抗菌活性(antibacterial activity)是指抗菌药抑制或杀灭细菌的能力,常用最低抑菌浓度MIC(minimum inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度MBC(minimal bactericidal concentration,MBC)表示,通常采用体外抑菌和杀菌试验测定。


对于某种抗菌药,测定并掌握其对常见病原菌临床分离株的抗菌活性,对给药方案设计和临床用药都具有重要的参考价值。细菌是最常见的重要病原微生物,不同的病原菌对不同的抗菌药物有不同的敏感性。抗菌药物对病原微生物的抑制或杀灭能力称为抗菌活性,常以药物敏感性试验测定。


04

抗菌药敏感性试验测定方法有哪些?


  抗菌药敏感性试验测定方法主要有稀释法和纸片扩散法。稀释法是将抗菌药经过倍比稀释后加入培养基,然后接种测试细菌,观察测试细菌在不同药物浓度的培养基中的生长情况,根据测试细菌生长情况判定对抗菌药的敏感程度。

扩散法是将含有抗菌药的滤纸片贴在已接种了测试细菌的琼脂表面,纸片周围的菌株不能生长,从而在纸片周围形成透明的抑菌圈,抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度。


纸片扩散法


05

稀释法测定药物敏感性的评价指标是什么?


  在稀释法中以抑制细菌生长为评定标准时可用最低抑菌浓度(MIC)表示,即能够抑制培养基内细菌生长的最低浓度。在一批实验中能抑制50%或90%受试菌所需MIC,分别称为MIC50和MIC90。以杀灭细菌为评定标准时,使活菌总数减少99.9%以上,称为最小杀菌浓度(MBC)。MIC和MBC的单位一般为µg/mL或mg/L。


通常根据抗菌药对某一细菌的MIC,结合该药的常用剂量所能达到的血药浓度划定细菌对各种抗菌药敏感或耐药的界限。其标准是当一种细菌引起的感染用某种药物的常用量治疗有效,即常规用药时达到的平均血药浓度超过MIC 5倍以上者为高度敏感。


当细菌引起的感染仅在应用高剂量药物时才有效,即常规用药时达到的平均血药浓度相当于或略高于MIC为中度敏感;低于MIC或细菌能产生灭活抗菌药的酶时均判定该细菌对该药为耐药。


 稀释法结果解读(伪中间葡萄球菌为例)


注解

S-敏感,常规用量治疗有效

R-耐药,常规用量治疗不能抑制细菌的生长

I-中介,常规用量在药物生理浓集部位可能有效,加大用药剂量可能有效

NI-无匹配数据,数据库中无此条件下对应此药物数据。


06

药敏试验的流程是怎样的?


  样本到实验室后开始前处理和接种培养,由于细菌种类和生活习性不同其生长速度也存在差异,所以整个药敏试验的报告周期是3-5日,是无法加急处理。流程如下:


药敏试验送检流程图


07

结语

 中瑞动检实验室依据宠物专用SWIN系统标准(美国药敏数据标准CLSI、欧洲药敏数据标准UCAS、美国药敏数据标准FDA、专家系统)进行药敏综合结果分析,为临床出据更精准的结果,辅助临床用药指导。从下图部分致病菌及标本来源对照表即可看出此药敏系统的精细程度。

部分致病菌及来源对应表


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