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《兽医实验室检测方法验证与试剂选择评价》
2023年8月23-25日，中国兽医协会第十届兽医大会在南京顺利召开。中国动物疫病预防控制中心兽医诊断室副处长顾小雪在兽医实验室检测专场讲授了《兽医实验室检测方法验证与试剂选择评价》专题报告。
准确可靠的检测结果是采取相应措施预防与控制、净化、消灭动物疫病的先决条件。在样品、人员、设施环境、设备、方法、试剂耗材等多个因素中，检测方法和试剂是影响兽医实验室检测结果最主要的两个因素。本报告从方法验证和方法确认、检测试剂选择评价、检测试剂技术验收三方面进行了具体阐述。
根据ISO/IEC 17025标准，本报告详细阐述了关于实验室方法验证的具体要求，强调了验证不仅需要识别实验室的人员、设施和环境、设备等资源是否符合标准方法要求，还应通过试验证明结果的准确性和可靠性，必要时进行实验室间比对。同时介绍了医学检测和基因扩增领域有关方法验证的标准，提出方法验证的技术指标宜包括检出限、重复性、分析特异性（包括基质效应）。
根据WOAH陆生动物诊断试验和疫苗手册，本报告还从分析敏感性、分析特异性、诊断敏感性、诊断特异性、可重复性五个方面，详细介绍了兽医实验室检测试剂的选择与评价体系。
分析敏感性（检出限）
检测试剂在一定置信水平（通常是95%）下的最低检测浓度。使用基质系列稀释分析物，在阳性率100%和0%之间的稀释度中选择阳性率为95%的最低浓度作为LOD。
分析特异性
将样品中的目标分析物（如病原、抗体、基因组序列）与非目标分析物（包括基质成分）区分开的能力。其中内外源干扰物尤其影响核酸提取的效率。
诊断敏感性
感染或发病动物中检测阳性动物所占比例。诊断特异性：未感染或未发病动物中检测阴性所占比例。评价诊断敏感性和诊断特异性的准确性取决于样品盘的质量和数量，样品盘的质量优劣依次为用金标准方法鉴定过的样品盘、已知阴性和阳性来源的样品盘、临床样品。
重复性
在同一实验室使用相同方法进行批内与批间测量的一致性比较，包括批内重复性和批间重复性。再现性：在不同实验室使用相同方法保持检测结果一致性的能力。至少需要3家实验室。
报告还以非洲猪瘟核酸检测试剂和非洲猪瘟抗体ELISA试剂评价为案例，介绍了如何准备测试以上五方面特性的样品盘，分析了两种试剂不同特性的评价结果。
最后以布鲁氏菌血清抗体检测试剂盒和非洲猪瘟病毒核酸荧光PCR试剂盒为具体实施案例，讲解了如何利用标准品进行试剂验收，论证了标准品是试剂评价和验收时的重要工具。
整理：达剑森(扬州市邗江区动物疫病预防控制中心)
